Calidad de laboratorio
HPLC
Cromatografía líquida de alta resolución: la técnica de separación que genera la mayoría de los números de pureza de péptidos y qué dice realmente su salida.
- Última actualización:
- 2026-07-22
Visión general
La Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) es una técnica de separación que impulsa una muestra disuelta a través de una columna empaquetada a alta presión. Los distintos componentes de la muestra interactúan de forma distinta con la columna y eluyen (salen) en tiempos distintos. Un detector a la salida de la columna produce un pico por cada componente.
Para el análisis de péptidos, la HPLC suele funcionar en modo de fase reversa con detección ultravioleta alrededor de 214 nm (la longitud de onda a la que los enlaces peptídicos absorben con fuerza). El resultado es un cromatograma: un gráfico de señal del detector frente al tiempo, con un pico principal (el péptido) e, idealmente, picos pequeños o ausentes en otros lugares (impurezas).
Por qué importa
Casi todas las cifras de pureza de péptidos en un CoA provienen de HPLC. Comprender qué representa el número facilita leer un CoA como evidencia y no como marketing.
Conceptos clave
Porcentaje de área
El número de pureza en un CoA de péptido suele ser el «porcentaje de área»: el área bajo el pico principal dividida por el área total bajo todos los picos. «98% de pureza» significa por tanto que el 98% del material detectado por UV tiene el tiempo de retención del pico principal.
Dependencia del método
Distintos métodos de HPLC pueden producir distintos números de pureza para la misma muestra. Un CoA bien redactado especifica la columna, el gradiente y la longitud de onda.
Límites de detección
La detección UV sólo ve lo que absorbe a la longitud de onda elegida. Las impurezas que no absorben bien a 214 nm pueden estar presentes sin producir pico.
Errores frecuentes
- «Pureza HPLC» no es pureza química. Es la fracción de señal UV atribuible a un pico bajo un método concreto.
- «99% puro» no es lo mismo que «libre de impurezas». El 1% restante puede contener péptidos relacionados (secuencias por deleción, productos de oxidación) con su propia biología.
- La HPLC no mide esterilidad, endotoxinas ni masa. Mide la composición del material relacionado con el péptido disuelto en la inyección.
Interpretación práctica
Cuando un CoA reporta pureza por HPLC, lea el número junto al método. Un número de pureza más alto bajo un método más discriminante es más evidencia que un número de pureza más alto bajo uno menos discriminante.
Limitaciones
La HPLC por sí sola no confirma la identidad. La identidad se confirma habitualmente por espectrometría de masas (véanse «LC-MS», «Ensayo de identidad»).